ÿþ<html> <head> <meta http-equiv=Content-Type content="text/html; charset=windows-1250"> <META name="keywords" content="HPLC, teorie, chromatografie, detektory"> <title>HPLC teorie - Detekce v HPLC</title> <style> <!--body {scrollbar-face-color: #FF0000; scrollbar-shadow-color: #00FFFF; scrollbar-highlight-color: #00FFFF; scrollbar-3dlight-color: #00FFFF; scrollbar-darkshadow-color: #00FFFF; scrollbar-track-color: #0000FF; scrollbar-arrow-color: #00FFFF;} /* Font Definitions */ @font-face {font-family:Tahoma; panose-1:2 11 6 4 3 5 4 4 2 4;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; font-size:12.0pt; font-family:"Tahoma";} --> </style> <script language="JavaScript"> <!-- function HighlightAnchor() { if (window.event.srcElement.tagName == "A") window.event.srcElement.style.color = "red"; } function LowlightAnchor() { if (window.event.srcElement.tagName == "A") window.event.srcElement.style.color = "blue"; } // --> </script> </head> <body lang=CS link=blue vlink=purple onmouseover="HighlightAnchor()" onmouseout="LowlightAnchor()"> <a name="_top"> <p><span style='font-size:12.0pt;font-family:Tahoma;color:blue'><b>Detek ní systémy - Detektory</b></span></p> <p><span style='font-size:10.0pt;font-family:Tahoma;color:blue'><b><a href="#_1_Odezva">1. Odezva detektoru</a></span></b></p> <p><span style='font-size:10.0pt;font-family:Tahoma;color:blue'><b><a href="#_2_Sum_drift">2. `um a drift</a></span></b></p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'>Detektory jsou umístny na konci kolony a analyzují efluent. Detektory zaznamenávají rozdíl mezi prochodem isté mobilní fáze a mobilní fáze obsahující eluovanou slo~ku celou detektoru. Detektory se nej astji dlí na detektory <I>koncentra ní</I> a <I>hmotnostní</I>. <b>Koncentra ní detektory</b> reagují na zmnu hmotnostní koncentrace slo~ky v efluentu <I>dm/dV</I> nezávisle na pYívodu slo~ky do detektoru. <b>Hmotnostní detektory</b> reagují na zmnu hmotnostního toku slo~ky v efluentu <I>dm/dt</I> do detektoru. Jiný zposob dlení je na detektory nedestruk ní a detektory destruk ní. V nedestruk ních detektorech nedochází k chemické zmn detekované komponenty, v destruk ních detektorech se detekovaná komponenta ireverzibiln mní.</p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'><b>Koncentra ní detektory</b> reagují na zmnu hmotnostní koncentrace slo~ky v efluentu <I>dm/dV</I> nezávisle na pYívodu slo~ky do detektoru. <b>Hmotnostní detektory</b> reagují na zmnu hmotnostního toku slo~ky v efluentu <I>dm/dt</I> do detektoru.</p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'>Jiný zposob dlení je na detektory <b>nedestruk ní</b> a detektory <b>destruk ní</b>. V nedestruk ních detektorech nedochází k chemické zmn detekované komponenty, v destruk ních detektorech se detekovaná komponenta ireverzibiln mní.</p> <p><span style='font-size:10.0pt;font-family:Tahoma;color:blue'><b><a name="_1_Odezva"></a><a href="#_top">1. Odezva detektoru</a></b></span></p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'>Odezva detektoro (mYený signál) je rozným zposobem ovlivnna objemovou rychlostí toku mobilní fáze celou detektoru, teplotou, naptím v síti, ne istotami v mobilní fázi a podobn - obecn náhodným aumem. MYený signál se tedy skládá jednak z u~ite ného, koncentrací analytu podmínného signálu a z poruch, které jsou zposobeny náhodnými nebo soustavnými vlivy v pYenosovém kanálu.</span></p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'>Mezi koncentrací slo~ky v efluentu <span style='font-family:Symbol'>r</span><sub>M</sub> a intenzitou analytického signálu R (odezvou detektoru) je nej astji lineární a v ideálním pYípad platí vztah pro koncentra ní detektor:</span></p> <td width=100%> <p align=center><img src="Figure/eq_7.gif" alt="eq_7.gif"></p> </td> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'>kde k<sub>1</sub> je konstanta úmrnosti, která zde vystupuje jako <b>citlivost</b>. Tento lineární vztah vaak neplatí pro vaechny detektory. Lineární úsek závislosti log R proti hodnotám <i>log</i> <span style='font-family:Symbol'>r</span><sub>M</sub> se nazývá lineární dynamický rozsah detektoru.</span></p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'>Plocha signálu y<sub>A</sub> pYedstavuje asov závislou intenzitu signálu (R), která je závislá na koncentraci detekované slo~ky v efluentu <span style='font-family:Symbol'>r</span><sub>M</sub>:</span></p> <td width=100%> <p align=center><img src="Figure/eq_8.gif" alt="eq_8.gif"></p> </td> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'>Platí-li pYedpoklad, ~e eluovaná látka vchází do detektoru ve form vále ku, pak její hmotnostní koncentrace <span style='font-family:Symbol'>r</span><sub>M</sub> je konstantní a rovna <i>m/V</i>, kde <i>m</i> je celková hmotnost komponenty ve vále ku a <i>V</i> je objem vále ku. Proto~e je <span style='font-family:Symbol'>r</span><sub>M</sub> konstantní, platí:</span></p> <td width=100%> <p align=center><img src="Figure/eq_9.gif" alt="eq_9.gif"></p> </td> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'>kde V = F<sub>m</sub>.t a je F<sub>m</sub> objemová rychlost toku mobilní fáze a dosazením za <span style='font-family:Symbol'>D</span>t = V/F<sub>m</sub> dostáváme:</span></p> <td width=100%> <p align=center><img src="Figure/eq_10.gif" alt="eq_10.gif"></p> </td> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'> a z této rovnice vyplývá, ~e plocha píku y<sub>A</sub> je pYímo úmrná celkové hmotnosti eluované komponenty a nepYímo úmrná objemové rychlosti toku mobilní fáze a je zYejmé, ~e pro kvantitativní vyhodnocení musí být protok mobilní fáze <b>konstantní</b>.</p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'> Pro <b>hmotnostní detektor</b> platí rovnice:</p> <td width=100%> <p align=center><img src="Figure/eq_11.gif" alt="eq_11.gif"></p> </td> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'> kde k<sub>2</sub> je konstanta úmrnosti, ostatní symboly mají stejný význam jako v pYedchozí rovnici. Pak mo~eme obdobn dosazením psát rovnici:</p> <td width=100%> <p align=center><img src="Figure/eq_12.gif" alt="eq_12.gif"></p> </td> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'> ze které vyplývá, ~e pro tyto detektory je plocha píku úmrná celkové hmotnosti eluované komponenty a je nezávislá na objemové rychlosti toku mobilní fáze.</p> <p><span style='font-size:10.0pt;font-family:Tahoma;color:blue'><b><a name="_2_Sum_drift"></a><a href="#_top">2. `um a drift</a></b></span></p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'> `um je amplituda základní linie vyjádYená ve voltech, ampérech nebo absorban ních jednotkách, která zahrnuje vaechny nepravidelné zmny signálu detektoru a je charakterizován jedním nebo více cykly za minutu. `um na základní linii je tedy krátkodobá zmna základní linie zposobená zmnou elektrického signálu, nestabilitou lampy detektoru, teplotními fluktuacemi a dalaími faktory. `umem se tedy rozumí kolísání odezvy detektoru pocházejících z periodických zmn v systému. `um se obvykle mYí od píku k píku tj. od vrcholu malého píku k úpatí druhého píku. `um je faktor, který limituje citlivost detektoru. Výaka jednozna n detekovatelného píku musí být dvojnásobek aumu základní linie. Ke kvalitativnímu ur ení se obvykle pokládá výaka píku (mez detekce) trojnásobku aumu a ke kvantitativnímu stanovení musí být výaka píku desetinásobek aumu. <b><a href="../Tip/lod_loq.htm">Výpo et meze detekce a meze stanovitelnosti</a></b></p> <p><span style='line-height:200%; font-size:10.0pt; font-family:Tahoma;margin-left:0.5cm'> Dalaí parametr vztahující se ke kolísání signálu detektoru je drift. Drift ukazuje dlouhodobou nestabilitu základní linie a vyjadYuje se jako promrný sklon obálky aumu ve voltech, ampérech nebo absorban ních jednotkách za hodinu. Drift je spojen obvykle pYi zmn teploty detektoru pYi jeho první polhodin provozu. Grafické znázornní aumu na základní linii a driftu základní linie: </p> <td width=100%> <p align=center><img src="Figure/sum_drift.gif" alt="sum_drift.gif"></p> </td> &nbsp; <!--- LAST MODIFIED ---> <p class=MsoNormal><b> <span style='font-size:8.0pt;font-family:"Monotype Corsiva";color:#FF0000'>Last modified: <script language="javascript"> <!-- datum = new Date (document.lastModified); mesic = new Array ('ledna', 'února', 'bYezna', 'dubna', 'kvtna', ' ervna', ' ervence', 'srpna', 'záYí', 'Yíjna', 'listopadu', 'prosince'); document.write (datum.getDate() + '. ' + mesic[datum.getMonth()] + ' ' + datum.getYear()); //--> </script> </span></b></p> <!--- LAST MODIFIED END---> </div> </body> </html>