Derivatizace v HPLC

1.2 Činidla pro karboxylové kyseliny

Alifatické karboxylové kyseliny neobsahují žádný chromofor a vykazují v ultrafialové oblasti spektra velmi nízké hodnoty absorbance. Proto se musí do molekuly zavést některý z chromoforů. Principiálně se jedná o esterifikační reakce. Tento požadavek splňují deriváty, jejichž molekula obsahuje aromatické jádro.

1.2.1 Fenacylbromid, naftacylbromid a jejich deriváty

Spektrální vlastnosti některých fenacyl a naftacylbromidů jsou sestaveny do tabulky. Zlepšit citlivost a selektivitu esterifikačních reakcí je použitím katalyzátorů jako crown ethery“ (makrocyklický polyether na bázi ethylenoxidu) a terciárních aminů. Crown-ethery (většinou 18-crown-6-ethery, kde 18 značí počet článků makroheterocyklu a číslo 6 počet atomů kyslíku v kruhu heterocyklu) mohou ve vnitřku svého kruhu solvatovat komplexotvorné kovové kationty a tvoři tzv. kryptáty. Dochází tak ke vzniku kryptátu kationu neutralizované karboxylové kyseliny a ten zvyšuje rozpustnost kationu v aprotickém rozpouštědle. Aktivovaný anion vytěsní bromid fenacylbromidu (nukleofilní substituční reakce). Karboxylová kyselina je neutralizovaná hydroxidem draselným, uhličitanem draselným nebo hydrogenuhličitanem sodným. Jako terciární aminy se používají triethylamin a N,N´-diisopropylethylamin, jako aprotická rozpouštědla se používají benzen, acetonitril ^[1] a dimethylformamid.^[2] HPLC analýza probíhá jak na normální tak na reverzní fázi s UV detekcí při 243 nm až 266 nm. Jako mobilní fáze na reverzní fázi se používají acetonitril/voda, methanol/voda nebo acetonitril/methanol/voda. Detekční limit se pohybuje řádově v nanogramech. Reakční schéma (p-bromfenacylbromid). Jako další činidla se používají p-nitrofenacylbromid,^[3]